Ученые очистили геном от герпесвируса

330
0
1179

 

Очистить зараженные клетки от герпесвируса помогла новая технология генетической модификации на основе бактериальной системы CRISPR/Cas9. Отчет о работе опубликовал Журнал PLoS Pathogen опубликовал.

К внушительной группе герпесвирусов относятся не только вызывающие герпес на губах и генитальный герпес HSV-1 и HSV-2, а также и возбудители других инфекционных заболеваний, таких как вирусы Эпштейна-Барр, ветряной оспы и другие. Они отличаются способностью к длительному латентному, скрытому состоянию в генетическом аппарате носителя, с периодическими вспышками «острой» фазы, на протяжении которой вирус распространяется и размножается, заражая новые клетки. Эта стратегия обеспечила вирусам герпеса необычайное распространение – считается, что носителями вируса является практически все население планеты.

Существует множество эффективных препаратов, пресекающих распространение и развитие вирусов герпеса в острой фазе. Но целенаправленных средств, способных «удалить» скрытый вирус в организме, нет. Для этого необходимо удалить ДНК вируса, которая скрыта среди собственных генов носителя. Эту возможность предоставляют новые технологии новой модификации CRISPR/Cas9. Специалисты из Университетского медицинского центра в Утрехте (Нидерланды) впервые испытали этот метод на вирусах герпеса.

Целями авторов эксперимента были выбраны герпесвируса типа 1 (простой герпес, HSV-1), типа 4 (вирус Эпштейна-Барр, EBV) и типа 5 (цитомегаловирус, HCMV). Для назначенных участков ДНК вирусов были созданы направляющие молекулы РНК, с помощью которых нуклеазы Cas9 смогли распознавать их в генетическом аппарате хозяина и разрезать.

Эксперименты, поставленные на культурах животных и человеческих клеток линии Vero (линия клеток, применяемая для культивирования), показали, что разрез в одном участке ДНК вируса уменьшает количество зараженных клеток вдвое, а два разреза приводят практически к абсолютному удалению вирусов герпеса.

  • Вирус HCMV (цитомегаловирус) потерял свою активность с одним разрезом участка ДНК.
  • Вирус EBV (вирус Эпштейна-Барр) уменьшил активность на 50-60% с одним разрезом и 95% после двух разрезов участка ДНК.
  • HSV 1 (вирус простого герпеса) оказался крайне устойчив и понадобилось атака при помощи 2-х направляющих РНК.

Специалисты испытали множество вариантов направляющих РНК и показали, что молекулы, связывающиеся с различными генами или разными участками одного гена имеют отличительную эффективность. В частности, во время экспериментов на HCMV было выяснено, что атака на важнейшие для размножения и развития вируса гены производит сильное давление отбора и приводит к появлению мутагенных форм с трансформированной последовательностью ДНК в месте сцепления направляющих РНК. Именно поэтому использование этой процедуры исправления требует особых методик и мер при назначении антибиотиков.

Наша работа, доказала, что при помощи генетической модификации системы CRISPR/Cas9 можно эффективно воздействовать на геномы вирусов герпеса при профилактики и лечения, для угнетения размножения вирусов и удаления скрытной инфекции

Благодаря этому, стоит вспомнить о перспективе применения системы CRISPR/Cas9 для очистки зараженных клеток от ВИЧ.

Будьте здоровы!

Главный редактор сайта Оздоровач.ру